Hola a todos,
soy Laura Alguacil Cuellar, estudiante de doctorado
en el Programa de Ciencias Biomédicas y Salud Pública,
bajo la dirección de la doctora Ana Lostreit Izquierdo
en el Instituto de Salud Carlos III.
Voy a presentar una parte de mi tesis
que, como podéis ver, se centra en el estudio genético
de cepas clínicas y ambientales resistentes antifúngicos del hongo
Aspergillus fumigatus.
Aspergillus fumigatus es un hongo patógeno
incluido en la lista de patógenos fúngicos prioritarios
de la OMS.
La aparición de cepas de Aspergillus fumigatus resistentes
a azoles en muestras clínicas representa un desafío significativo
para la eficacia de las terapias antifúngicas
y dicha resistencia se ha vinculado con el uso ambiental de fungicidas.
Con esta información en mente, el objetivo principal de este estudio
fue investigar la prevalencia y las características genéticas
de cepas de Aspergillus fumigatus en entornos clínicos y ambientales.
Específicamente se buscó evaluar la presencia de cepas resistentes
a azoles tanto en el aire ambiente como en muestras clínicas,
examinar si compartían genotipos idénticos
y explorar posibles conexiones entre los reservorios ambientales
y clínicos.
Para ello, se llevó a cabo un estudio durante 30 meses,
durante los cuales recibíamos
los aislados de aspergilosis invasiva de dos hospitales de Madrid
y además realizábamos captaciones ambientales en dos zonas próximas
a dichos hospitales,
para identificar los aspergilos fumigatus presentes en el aire.
A todos los aspergilos fumigatus obtenidos se les realizó un
cribado de susceptibilidad a diferentes antifúngicos,
siguiendo los protocolos estandarizados de UCASC.
De aquellos que resultaron resistentes a azoles,
se identificó el mecanismo de resistencia
mediante la amplificación y secuenciación del gen C51A
y su promotor.
Además, para conocer mejor su relación genética,
realizamos un genotipado utilizando el método Tresper,
que es una metodología previamente desarrollada en nuestro laboratorio.
Y finalmente, llevamos a cabo la secuenciación masiva
de las muestras más relevantes de este estudio.
Para que tengáis una idea de la carga de trabajo
comentaros que se analizaron un total de 950 aislados,
de los cuales 442 provenían de muestras clínicas
y 508 eran aspergilos fumigatos ambientales.
Se detectó resistencia a azoles en el 11% del total de aislados,
aunque las cepas ambientales fueron las mayoritarias.
Tras analizar los mecanismos de resistencia,
cabe destacar que el 42% de los aislados clínicos
y el 77% de los ambientales presentaron la mutación TR34L98H,
mientras que los aislados resistentes restantes
no mostraron mutaciones en el gen CYP51A.
Tras el genotipado de las cepas,
os muestro en la tabla los 19 genotipos
Tresberg comunes entre cepas clínicas y ambientales que identificamos
y en la figura la distribución temporal
de los mismos.
Por último, y aunque aún nos queda mucho trabajo por hacer
con los datos de secuenciación masiva,
os puedo adelantar que los resultados han sido prometedores.
Por ejemplo, encuadrado en azul tenemos un genotipo
en el cual la muestra ambiental y clínica
únicamente está diferenciados por 6 SNPs,
por lo que posiblemente sea el mismo clon.
Otro ejemplo aún más interesante es el encuadrado en amarillo,
ya que en este caso ambas cepas con el mismo genotipo
son resistentes a azoles.
La primera en aislarse fue la ambiental
y unos meses más tarde la clínica desarrollando la infección fúngica.
Y ambas se diferenciaron en 23 SNPs, lo que es suficiente distancia
como para confirmar que no se trata del mismo clon,
pero sí que podría tratarse del mismo linaje.
Las conclusiones de su trabajo serían que nuestros hallazgos
demuestran que las cepas de Aspergillus fumigatus resistentes
a azoles están presentes en el aire ambiente de Madrid
en una proporción mayor que en los aislados clínicos.
Que la mutación TR34L98H
fue el mecanismo de resistencia antifúngico más frecuente,
aunque también se encontraron aislamientos y mutaciones
en el gen CYP51A.
Además, los genotipos compartidos entre aislados clínicos y ambientales
destacan el potencial transmisión ambiental de cepas resistentes.
Y por último,
recalcar que son necesarios los programas de vigilancia
de la resistencia a antifúngicos en el medio ambiente,
así como una mayor comprensión de los factores que impulsan
esta resistencia con el fin de desarrollar medidas preventivas
que mitiguen el impacto de la resistencia a azoles
en el ámbito clínico.
Este es nuestro grupo de trabajo en el Instituto de Salud Carlos III,
nuestros colaboradores externos para este estudio.
Muchas gracias por vuestra atención.