Muchas gracias, José.
Lo primero, buenos días a todos.
Y yo en mi caso voy a hablar de los efectos
de la inhibición androgénica neonatal sobre el desarrollo
del núcleo ventromedial del hipotálamo en ratas macho y hembra.
El núcleo ventromedial forma parte del circuito hipotalámico
que regula la ingesta, principalmente homeostática.
Y como se puede observar en la diapositiva,
este circuito se encarga de recibir e integrar señales periféricas
que están informando sobre el estado metabólico
y nutricional del organismo.
Y en función de este estado puedes encadenar una respuesta orexígena
promoviendo el inicio de la ingesta que aparece representada
con las flechas de color rojo.
O, por otro lado, desencadenar una respuesta anorexígena,
es decir, inhibiendo la ingesta,
que en este caso estaría representado con las flechas de color azul.
Este circuito está conformado por diversos núcleos,
entre ellos el paraventricular del hipotálamo,
el dorsomedial, el hipotálamo lateral,
el núcleo arqueado, del que ha hablado Rocío,
y el núcleo ventromedial del hipotálamo, que es el objetivo
de este trabajo.
Este núcleo alberga una mezcla heterogénea
de poblaciones neuronales que además se distribuyen de forma diferencial
entre las distintas subdivisiones que componen el núcleo
y se han asociado distintas funciones neuroendocrinas y de regulación
de la conducta.
Muchas de ellas, además,
relacionadas con la regulación de la alimentación,
como por ejemplo sobre la regulación del peso corporal,
la anestesia energética, la regulación de la glucosa
y del apetito.
Y estos últimos años hay bastante evidencia que está indicando
que este núcleo está especialmente implicado
en la regulación de la saciedad y en contrarrestar los efectos
de una dieta o un entorno obesogénico.
Además, es un núcleo que expresa receptores de estrógenos
y de andrógenos
y que ya en un trabajo clásico de Machumoto y Garay
se demostró que la morfología del núcleo es vulnerable
a la acción de las hormonas gonadales durante los primeros días
postnatales.
Es que se ha demostrado a lo largo
de estas últimas décadas que estas primeras etapas de desarrollo,
este periodo perinatal, es muy relevante
para la correcta conformación de este circuito
para que de este modo pueda actuar de forma óptima
durante la etapa adulta.
Se ha observado que tanto las condiciones externas
como puede ser la dieta o las internas,
los propios niveles de hormonas circulantes,
pueden estar afectando o modulando la correcta programación
del circuito.
En un trabajo pionero de Buret y Simerly demostraron
que la ausencia de leptina estaba provocando un retraso
del establecimiento de las conexiones entre los diversos núcleos
que conforman este circuito.
Como puede verse en la figura de la izquierda,
a día postnatal 6, 12 y 16 vemos un menor número de proyecciones
desde los diversos núcleos y además en la etapa adulta
una menor densidad de fibras en este circuito.
Posteriormente se ha demostrado que otras hormonas
también son importantes para la programación del circuito,
como por ejemplo el caso de la grelina,
la insulina o las hormonas gonadales, entre ellas los estrógenos
y los andrógenos, que son el objetivo principal de este trabajo.
Como bien ha explicado mi compañera Rocío García,
a día postnatal 1 hay un pico de testosterona
en el macho y que a su vez la testosterona
presenta dos principales vías de metabolización.
La primera de ellas, la aromatización,
es decir, la conversión de testosterona a estradiol
mediante la enzima aromatasa
y la reducción, que es la conversión de testosterona a hidrotestosterona
o DHT a través de la 5-alfa reductasa.
Además, en trabajos previos se ha observado
que la inhibición de los receptores de andrógenos
o de cada una de las dos principales vías
de conversión enzimática, la aromatización y la reducción,
desde el día postnatal 1 hasta el día postnatal 5,
puede producir una serie de alteraciones a largo plazo,
en etapa adulta.
Entre ellas sobre el peso corporal, la ingesta,
la grasa visceral y también sobre la expresión
en el hipotálamo de péptidos anorexígenos y anorexígenos
y de receptores de estrógenos y de andrógenos.
Y además también sobre los niveles circulantes en etapa adulta
de las hormonas gonadales.
Además, muchos de estos resultados se producen de forma diferencial
en machos y en hembras.
A la vista de estos resultados en la etapa adulta,
en el hipotálamo y sobre otras variables periféricas
y de peso ingesta, etc.,
planteamos el objetivo de estudiar los efectos durante el desarrollo
de la inhibición de receptores de andrógenos
o de cada una de las dos principales vías de metabolización
de la testosterona,
desde el día postnatal 1 hasta el día postnatal 5,
sobre el volumen
y el número de neuronas del núcleo ventromedal del hipotálamo
y sus subdivisiones, en el día postnatal 11, que es un día
en el que este circuito se encuentra conformándose,
está en desarrollo.
En cuanto al diseño experimental,
tanto las ratas macho como hembra
fueron tratados mediante inyecciones subcutáneas de forma diaria,
como comentaba, desde P1 hasta P5,
que se ha demostrado que es una ventana crítica
para el efecto programador y modulador de los andrógenos.
Y utilizamos cuatro tratamientos.
Son los mismos que ha explicado Rocío, pero bueno,
los vuelvo a repasar.
La flutamida, que es un inhibidor competitivo
de receptor de andrógenos.
Finasteride, que es un inhibidor de la 5-alfa-reductasa,
es decir, inhibe la conversión de testosterona de HT.
Letrozol, que es un inhibidor de la aromatasa,
inhibe la conversión a estradiol.
Y a los controles se les inyectó únicamente
con el vehículo aceite de sésamo.
A día postnatal 11,
Realizamos el sacrificio mediante perfusión transcardiaca,
se extrajeron los cerebros que se cortaron con ayuda
de un criostato a inserciones coronales
de 40 micrómetros de grosor.
Cortamos el cerebro en siete series
y a la primera de estas series le aplicamos una tinción de nísel,
que es una tinción que marca los cuerpos celulares.
Estas secciones fueron fotografiadas con un microscopio
que tiene una cámara integrada y para estimar tanto el volumen
como el número de neuronas nos ayudamos del software ImageJ.
Para estudiar el núcleo y las distintas regiones
que lo componen, nos basamos en el ALDAS esterotáxico de cerebro
de rata de Paxinus y Watson,
que divide el núcleo en distintas divisiones,
entre ellas la división anterior,
que además comprende la subdivisión anterior,
la división medial, que es la que abarca prácticamente
la totalidad del recorrido rostro caudal del núcleo
y contiene las subdivisiones que han sido más estudiadas,
entre ellas la dorso medial, central y ventrolateral.
Y finalmente la división posterior,
que a su vez comprende la subdivisión posterior.
Además, el núcleo está rodeado por una cápsula fibrosa
que Paxinos y Watson denominan el CHEL.
En cuanto a resultados del primer experimento,
en el que analizamos el volumen del núcleo adiaposnatal 11,
No encontramos diferencias entre ninguno de los grupos
para el volumen total
ni para las tres principales divisiones,
pero en cambio,
al analizar las subdivisiones de forma pormenorizada,
observamos en la subdivisión dorsomedial dimorfismo sexual
entre los controles, es decir,
presentando a los machos un mayor volumen que las hembras.
Y con el tratamiento de finasterida, es decir,
inhibiendo la vía de la reducción, se revirtió este dimorfismo,
en este caso presentando a las hembras un mayor volumen
que los machos.
El tratamiento con el letrozol no afectó a este dimorfismo
que encontramos de forma natural.
Y el tratamiento con flutamida,
es decir, inhibir los receptores de andrógenos,
hizo desaparecer este dimorfismo.
Al analizar la subdivisión central,
en este caso no observamos dimorfismo sexual entre controles.
Pero el tratamiento con flutamida, como comentaba,
inhibir los receptores de andrógenos,
hizo aparecer dimorfismo en esta subdivisión,
mostrando en los machos un mayor volumen que en las hembras.
Y además, al comparar las hembras entre ellas,
también observamos que en las hembras finasteride presentan
un mayor volumen que en las hembras flutamida.
Por otro lado,
al analizar los resultados del segundo experimento,
en el que analizamos el número de neuronas positivas de NISEL,
detectamos tanto en la división medial
como en una de las subdivisiones que lo componen,
la subdivisión dorsomedial,
dimorfismo sexual con el mismo patrón,
es decir, con el macho presentando un mayor número de neuronas
que la hembra, y con los tres tratamientos,
es decir, inhibir el receptor de andrógenos
y las dos principales vías de metabolización de la testosterona,
hicieron desaparecer este dimorfismo que encontramos de forma natural.
Y también, al analizar la subdivisión central,
encontramos el mismo resultado que para el volumen, es decir,
las hembras finasteride mostraban un mayor número de neuronas
que las hembras glutamida.
Y paso a comentar las conclusiones.
En primer lugar, los resultados de ambos experimentos indican
que el desarrollo morfológico del núcleo presenta dimorfismo sexual
en la subdivisión dorsomedial a día posnatal 11, que es
una región que no está tan asociada con conductas reproductoras
ni conductas que se han considerado tradicionalmente
sexualmente dimorfas, sino que parece ser que es una región importante
para la regulación del metabolismo, la hemostasis de la glucosa
y el control del apetito.
En segundo lugar, la presencia o ausencia de dimorfismo sexual
estructural en condiciones basales y su eliminación o reversión
tras la inhibición de los receptores de andrógenos de la 5-alfa-reductasa
o de la aromatasa nos están indicando que el estradiol,
la testosterona y la DHT están participando activamente
en la diferenciación sexual del núcleo.
En tercer lugar,
la respuesta diferencial al tratamiento en función
de la subdivisión estudiada apunta a que las distintas
poblaciones neuronales se distribuyen de forma diferencial
entre las distintas regiones del núcleo,
resaltando la importancia de no solo estudiar el núcleo
en su totalidad, Y finalmente, en conjunto,
estos hallazgos apoyan la hipótesis de que los andrógenos
actúan durante ventanas críticas del desarrollo para modular
la morfología neuronal del núcleo ventromedial del hipotálamo,
una región que se ha ido demostrando que es importante
para la regulación del apetito y para contrarrestar los efectos
de una dieta o un entorno mesogénico.
Muchas gracias.
Bueno, pues pasamos al turno de preguntas.
Yo tengo una pregunta.
En la metodología,
tanto Rocío como tú, habéis usado como esas tres moléculas
que bloquean el sistema androgénico por tres vías distintas, ¿no?
Puede ser que al bloquearlo de una vía,
puede ser que haya un mecanismo de compensación en otra vía y,
no sé, una sobreactivación de ese sistema a través de ahí.
¿Qué opinas sobre eso
y qué opinas sobre a lo mejor combinar dos tratamientos
o a lo mejor los tres e intentar bloquearlo completamente?
Sí, estoy totalmente de acuerdo.
Puede, vamos,
creo que se están produciendo mecanismos de compensación,
tanto a nivel de enzimas, es decir,
a bloquear una vía puede que se esté.
Aumentando la regulación a través de otra de las vías.
Es que es complejo porque aquí, aunque resumimos con dos vías
el metabolismo de las hormonas esteroideas,
es mucho más complejo, ¿no?
Y puede que los tratamientos estén afectando de forma diferencial
y, además, dependiendo de cada población neuronal,
se ha visto que hay una mayor expresión
tanto de receptores de estrógenos
como de andrógenos o de las propias enzimas
que están implicadas en el metabolismo.
Así que yo creo que sí, que sería interesante
combinar distintos tratamientos a la vista
también viendo un poco más.
Estos son los primeros resultados que he obtenido de la tesis,
aún falta mucho por desarrollar y vamos
a ir obteniendo más resultados, pero sí, sería interesante.
Lo ideal sería hacer todas las combinaciones posibles,
pero yo en mi caso, por ejemplo, sí que haría algunas combinaciones
específicas a la vista de todos estos resultados.
También tiene como unos riesgos de que los efectos secundarios
también van a ser más complejas pero bueno eso es otra cosa
tener en cuenta gracias alguna pregunta más en la sala
pues perfecto gracias.