Bueno, pues lo primero, muchas gracias por la organización
de todo y a vosotros por asistir.
Yo soy Lucia Garrido y voy a presentar este estudio
que hemos hecho en colaboración con la Universidad Carlos III de Madrid,
la Universidad de Alcalá y el Centro de Química Aplicada
y Biotecnología también de Alcalá.
Como este estudio, al igual que el de mis compañeros,
se enmarca un poco en el ámbito de la adicción,
os voy a comentar un poquito de qué se trata.
Como ya sabremos casi todos, los trastornos por abuso
de sustancias se caracterizan por ser trastornos crónicos recurrentes.
Donde hay una compulsión por la búsqueda de droga,
donde hay una pérdida de control por este consumo de la droga
y donde, además, durante la fase de abstinencia,
es decir, cuando no está la droga presente,
surge un estado emocional negativo por la falta de esa droga,
de esa sustancia de abuso.
Además, a nosotros nos interesa mucho esta fase de la abstinencia
porque es en ella cuando surge un fenómeno
que se denomina incubación del craving,
incubación de las ganas de volver a consumir.
Esta incubación del craving se define como un incremento progresivo
durante la abstinencia de las ganas de volver a consumir,
pero las que se encuentran mediadas por toda la parafernalia
que asociamos con el consumo de la droga.
De manera que cuando aparece ese bar o ese amigo o esas señales,
se aumentan tus ganas de volver a consumir.
Y eso está evidentemente muy
relacionado con la recaída, que es uno de los grandes problemas
que nos encontramos en las adicciones.
Además de eso, nuestro grupo lleva tiempo
interesado en el estudio del policonsumo de cocaína y alcohol
por dos factores principales,
que uno sería la alta prevalencia de este patrón en el policonsumo,
ya que la mayoría de las personas que consumen cocaína
también consumen alcohol,
y el segundo aspecto es la peligrosidad
y la toxicidad y el incremento en la letalidad
de este policonsumo en comparación con el consumo individual.
Así que nuestro grupo en general lo que está interesado
es en encontrar las alteraciones o en entender las alteraciones
que se producen en este policonsumo y justamente en esa fase
de incubación del craving o incubación del seeking,
que decimos en los animales porque ellos van a buscar la droga,
entonces, bueno, incubación del seeking.
En este caso, en este proyecto,
lo que hicimos fue utilizar la herramienta de la metabolómica
para encontrar estas alteraciones en la incubación del seeking del.
Ah, perdón.
Perdón, del policonsumo de cocaína y alcohol.
¿Y por qué la metabolómica?
Bueno, pues la metabolómica sube una herramienta bastante útil
para analizar las alteraciones bioquímicas
que subyacen a toda la psicopatología de las diferentes enfermedades.
Además, es una técnica muy poco invasiva
y que nos puede aportar biomarcadores que luego sean útiles
para un diagnóstico precoz, incluso para el tratamiento.
La metabolómica,
como podemos ver en este esquema bastante resumido,
Los resultados en el cambio en el metaboloma también nos van a informar
de las alteraciones que se han podido producir en el genoma,
en el transcriptoma y en el proteoma,
por ser como la última de todas estas ómicas.
Y es por ello que muchos o varios estudios,
diferentes estudios, se han encargado o han intentado investigar
las alteraciones que se producen en las metabolitos
y en las vías metabolómicas tras el consumo, tras la abstinencia
y también tras la recaída a diferentes sustancias de uso,
es decir, en las diferentes fases de ese ciclo de la adicción.
Es por todo ello que en este estudio el principal objetivo
fue investigar las alteraciones metabolómicas que se asociaban
con esa incubación del psiquin tras el poco consumo de cocaína
y alcohol, así como intentar buscar
biomarcadores que pudiéramos relacionar con este fenómeno
de incubación del psiquin.
Y para ello utilizamos un análisis metabolómico
no dirigido.
La primera fase de este estudio
consistió en tener un modelo de incubación del Draxix,
que consistía en una primera fase de autoadministración,
donde podemos diferenciar tres grupos experimentales,
los que se autoadministran suro-salino, cocaína y los que se van
a autoadministrar cocaína y alcohol de manera conjunta,
para luego comenzar una fase de retirada,
de abstinencia forzada en los animales,
que puede durar dos días o treinta días.
Tras esta abstinencia, los animales,
Les vamos a hacer un test de conducta de drug seeking
para ver cuánto están buscando esa droga,
con la idea de que tras 30 días la búsqueda sea mayor
y veamos ese fenómeno de incubación del drug seeking.
Después, transacrificados
y el plasma que obtenemos de ellos va a ser analizado
mediante la cromatografía líquida de alta eficacia
acoplada a la espectrometría de masas de alta resolución.
Además, este estudio, que fue lo que hicimos en Alcalá,
lo hicimos utilizando dos modos de ionización
y dos columnas de separación, que las tenemos aquí en el HPLC,
estoy señalando, pero con la mano, para separar los metabolitos,
con el objetivo, todo ello,
de conseguir un mayor número de metabolitos todo el rato.
Bien, os voy a presentar muy brevemente
el análisis de los datos porque fue bastante complejo
y de lo cual se encargó Carlos León de la Universidad,
Carlos III, que consistió primero en detectar todos los metabolitos,
todo con software, en este caso con el Compound Discover.
Después se filtraron los datos,
todos aquellos que no servían, por así decirlo,
que eran muy parecidos a los que encontramos en los blancos,
no se parecían a las muestras de control, etcétera.
Posteriormente, analizamos los datos utilizando el software Metaboanalyse
y lo que queríamos ver en este experimento
era la diferencia que podíamos encontrar de metabolitos
tras la prueba de drag-seeking a los 30 días en comparación
con la prueba del día 2,
qué cambios se habían producido durante ese fenómeno de incubación
del seeking.
Esto lo hicimos en los tres tratamientos
y, evidentemente, en los dos sexos, de manera independiente.
Además, como queríamos evitar.
Contar con los metabolitos
que simplemente podían haber cambiado por el tiempo,
por el tiempo que va entre los dos días
y los treinta días, eliminamos todos aquellos metabolitos
que también aparecían en la comparación
del grupo suerosalino,
porque pensamos que se debían simplemente al tiempo y no
a ningún fenómeno de incubación, evidentemente.
Como podemos ver en las gráficas de los volcanoplot,
el número de metabolitos que se encontró.
En esta comparación, en verde tenemos
los que incrementan sus niveles tras la prueba de drug-seeking
de los 30 días en comparación con los 12 días
y en rojo los que disminuyen.
El número de metabolitos que se encontró fue inmenso,
fue enorme y fue muy contundente.
Es difícil analizarlo y poder sacar conclusiones.
Así que lo que decidimos fue analizar las rutas metabólicas
en las que estos metabolitos se podían encontrar implicados
para que nos hablaran un poco de qué rutas y, por tanto,
qué funciones se podían ver comprometidas
debido a este fenómeno de incubación del craving o del seeking,
porque hablamos de animales.
Así que eso va a ser lo que os voy a presentar.
En el caso del tratamiento de cocaína,
había muchísimas vías que se encontraban alteradas
y muchísimos metabolitos,
pero las principales fueron el metabolismo del tristófano,
la biosíntesis de espermina y espermina y el ciclo de la urea.
En cuanto al metabolismo del tristófano,
que ya sabemos que es un aminoácido muy importante, esencial, etc.,
se va a metabolizar a través de tres vías principales.
La de la serotonina, que ya fue relacionada con la adicción,
fundamentalmente con el consumo de cocaína,
veían que diferentes metabolitos se veían alterados.
La vía del indol y también la vía de la quinurenina.
Y esta es especialmente relevante porque ya ha sido relacionada
en otros estudios con la adicción y con la capacidad
que tiene de modular diferentes conductas adictivas
cuando se modula esta vía.
Lo que ocurre
es que diferentes metabolitos que participan en la vía
van a ser capaces de atravesar barrera hematoencefálica,
llegar hasta el sistema nervioso y aquí, mediante su metabolismo,
a través o de la vía neuroprotectiva o de una vía más neurotóxica,
pueden afectar a diferentes conductas relacionadas con la adicción,
no solamente del alcohol, también de la cocaína,
del THC, en fin.
En nuestro estudio lo que vimos es que en los machos
había un incremento.
Del ácido quinurénico,
en las hembras un incremento de la triptamina
y además también en machos veíamos un incremento
del piridoxal 5-fosfato, que es la forma activa
de la vitamina B6 que participa en diferentes funciones,
tanto en la síntesis de serotonina como en diferentes compuestos
de la vía de la quinurinina.
Parecía que esta vía se encontraba modulada
debido a la incubación.
Tanto en machos como en hembras,
aunque como vemos de manera diferente.
En cuanto al ciclo de la urea,
que también se denomina ciclo de la ornitina,
es muy importante para la eliminación del amonio,
etc., en el metabolismo hepático,
y lo que vimos fue también un perfil bastante diferente en machos
y en hembras.
Mientras que en hembras veíamos una disminución tanto de la ornitina
como de la citrulina, a la que esta da lugar,
en los machos veíamos un incremento del pyridoxal 5-fosfato,
Y de la 5-metiltioadenosina, que además esta,
que es un subproducto de la síntesis de poliaminas,
también participa en la síntesis de ornitina.
De manera que mientras que en las hembras vemos
como una disminución o una hipofunción, por así decirlo,
de esta vía,
o una menor expresión tras los 30 días de abstinencia forzada,
en los machos vemos justamente todo lo contrario.
En este caso, el píldor gosal también va a participar en funciones,
va a catalizar funciones importantes de la vía.
En el caso de la cocaína
y el alcohol, que es el consumo que más nos interesa a nosotros,
vimos también que había diferentes vías y rutas metabólicas
implicadas.
En este caso, me voy a centrar en el metabolismo
del ácido alfa-linolénico y en la biosíntesis de ácidos pilares
por sus funciones o por su participación en la adicción.
En el caso de los ácidos grasos poliinsaturados,
donde podemos diferenciar entre los omega-3 y los omega-6,
vimos que había como una disminución en la mayoría de ácidos omega-3
que encontrábamos alterados y un incremento
en los ácidos omega-6, lo cual también parece
que se corresponde con la literatura,
porque parece que en aquellos individuos
que hayan consumido alcohol de manera crónica
los ácidos omega-3 se encontraban disminuidos
y los omega-3 se encontraban aumentados,
aunque esos estudios se hicieron en cerebro y no en plasma,
como es nuestro caso.
Así que hay que tomarlo todo con pinzas,
evidentemente.
Y en cuanto a los ácidos biliares, ya para finalizar,
van a ser muy importantes en el metabolismo
de los ácidos grasos, como todos conocemos,
pero además también estos pueden sintetizarse en el cerebro
y van a cumplir importantes funciones durante la adicción,
en conductas adictivas, de refuerzo,
etcétera, etcétera.
Y en nuestro caso lo que oímos también fue alteración.
Fue una disminución de estos ácidos biliares,
sobre todo en machos,
pero también en hembras y en la mayoría fue una disminución,
aunque también hubo un aumento.
O sea, que esta vía se encontraba alterada.
Simplemente para concluir, hemos visto alteraciones.
En este modelo de incubación del psiquin,
tanto con el consumo de cocaína como con el consumo de cocaína y alcohol,
que van a ser muy diferentes, las vías modificadas
y alteradas son bastante diferentes,
porque podemos concluir que las alteraciones metabólicas
tras el consumo de cocaína están muy significativamente moduladas también
por el consumo simultáneo de alcohol.
Y que además estas diferencias van a ser alteraciones muy diferentes
en función del sexo en el que nos encontremos.
Y pensamos que este estudio puede ser un primer estudio
para continuar investigando las alteraciones metabolómicas
que se pueden encontrar
y que nos puede explicar en parte la vulnerabilidad a la recaída
tras el consumo de cocaína y alcohol.
Y muchas gracias y lo siento porque me he pasado.
¿Alguna pregunta en la sala?
Sí, yo tengo una pregunta.
Primero, muchas gracias por la presentación
y esos resultados, tantos resultados.
Tengo una pregunta sobre el proceso de analizar los datos, que es
que dijiste que pusisteis un filtro de 70%.
Sí, es que esto lo explico fatal.
Vale, por falta de tiempo.
Pero básicamente mi pregunta era que si no aparecen en 70%
de las muestras esos metabolitos, ¿no puede ser que
entre los tres grupos haya un grupo que no aparece en absoluto
ese metabolito y en otros dos grupos sí que aparece?
Por ejemplo, en la de cocaína y cocaína
y alcohol.
Y puede ser que estáis como perdiendo algunos metabolitos
que se expresan en función de en qué grupo están.
Claro, lo que hicimos fue como un pool
de todas las muestras, de todos los grupos de cocaína,
bueno, de los diferentes animales de cocaína,
por ejemplo, cocaína y alcohol, día de test, día 30.
Y todo eso se analizó.
Y después, cuando se analizaba de manera individual cada muestra,
no aparecía en ese pool del 70% como que no lo contábamos,
como que teníamos en cuenta.
Me estoy explicando fatal.
Si en el 70% de las muestras no ha aparecido un metabolito,
pero de ese grupo, no de todos en general,
porque entonces sí que estamos perdiendo.
O sea, ese 70% es de ese grupo.
Si no aparecían el 70% de las muestras de machos de cocaína
y alcohol que han pasado 30 días de abstinencia forzada,
no se consideraba porque con la cantidad enorme
de metabolitos que había, suponíamos que podía
ser debido a algún fallo, algún error o a lo que sea.
Y son como criterios
que en metabolómica se utilizan más,
con los que estoy familiarizada.
Claro, quiere decir que en cada grupo se miraba si vale.
Se hace de manera individual por grupo de los 12 que hay.
Intentamos no perder.
Muchas gracias, Lucía.
Enhorabuena por la presentación.
Están muy bien estos datos, la verdad.
Una pregunta justo de esto, del análisis.
He visto que cuando has mostrado
las ontologías sí había una corrección FDR,
pero en la comparación de los metabolitos individuales
habéis hecho una corrección FDR para la P. No,
o sea, esa corrección FDR
la hemos obtenido cuando hemos utilizado las vías,
cuando hemos identificado las vías metabólicas con el Envirol.
Los metabolitos que salían, que eran significativamente, bueno,
que eran diferentes significativamente,
eso simplemente lo hemos hecho con una P. No había FDR en ese caso.
Por eso yo creo que es fundamental,
es que no os lo van a aceptar para esto,
sino que tenéis que aplicar una corrección FDR
en los metabolitos individuales.
Ahí os van a, y sobre todo porque os va a facilitar mucho
la vida, porque ahí os va a salir lo que verdaderamente sobrevive
a la corrección por comparaciones múltiples.
Que aquí es que son miles de comparaciones,
el error tipo 1 se dispara.
Entonces, yo creo que eso os va a permitir quedaros con los.
Vale.
Creo que el API que utilizamos era un API no de 0.05,
sino de 0.01, porque había como muchísimos,
pero aún así, sí, por supuesto, lo tengo en cuenta.
Muchas gracias.
Yo creo que sí.
Sí, sí.
Revisaré los Excel también, por si acaso.
Has presentado solo los de cocaína y alcohol, ¿no?
He puesto primero cocaína, que sería triptófano y ciclo
de la urea.
Ah, vale, es que.
He ido muy rápido, perdón.
Y luego los de cocaína y alcohol, que no me sale aquí,
que sería el de los poliinsaturados y los ácidos biliares.
Yo creo que podrías comparar también con los salinos de cada tiempo.
Sí, eso era una de las cosas que queríamos hacer,
pero entonces la comparativa, este análisis de datos tan enorme,
habría que cambiarlo y dijimos, vale, vamos a analizar primero.
Centrándonos en el periodo de abstinencia
a ver si hay algún cambio y luego con el salino
pero eso fue también una de las cosas
que hablamos porque era muy interesante incluso en dos etapas
lo que os salga en uno luego os quedáis
con lo que os salga también en el otro y así podéis sacarlo más
sobre todo para guiar la discusión que si no va a ser un horror
¿y nada que lo vais a hacer en cerebro?
bueno, de momento creo que no bueno, no, de momento no.
Pero bueno, sería muy interesante porque claro,
muchos cambios lo que nos interesa luego es saber
qué alteraciones neurológicas hay evidentemente bueno,
esto como biomarcador puede ser claro,
de los positivos de los positivos que tiene
es que claro si luego lo quieres extrapolar más a humanos
el plasma es como mucho más fácil
de obtener evidentemente, pero bueno pues nada,
muchísimas gracias y enhorabuena gracias
¿alguna pregunta más?
Hola, Lucía.
Mi pregunta va a ser muy breve.
Primero te quería felicitar porque has presentado una cantidad
ingente de datos en muy poco tiempo y creo que tiene muchísimo mérito.
Yo te quería preguntar muy rápidamente porque precisamente
por esto han habido muchos datos, no me he quedado con uno.
Has mencionado la alteración de la vía del triptófano
y quería preguntarte cuáles habías visto exactamente
en machos y hembras porque he ido apuntando
pero no me he quedado con eso.
Vale, pues sería en machos sube el ácido quinurénico
y el prídex al 5-fosfato.
Y en hembras subiría la triptamina de esa vía indol.
Aunque lo que más se ha relacionado con adicciones
es la vía del ácido quinurénico,
que además vino aquí un psicobiótico a explicar cosas muy interesantes.
Y si está.
Vale.
Pues yo creo que vamos a.
Bueno, ¿quieres que te haga una pregunta?
No, no, no.
O sea, me estaba levantando.
¿Por qué tienes 156 y 123 animales?
¿Pero te refieres a esto?
O sea, cuando yo veo la N. Esto no es N, perdón.
Estos son los metabolitos alterados después de todo ese filtrado
y después de comparar y de quitar.
¿De dónde está la N?
¿De los animales?
No la he puesto.
Vale.
Iría aquí.
No hay más preguntas, señoría.
Vale.
La puedo decir si quieres.
En la conducta, claro.
De conducta no he puesto nada.
Pero tengo unas gráficas reservadas por si acaso.
Es muy importante ponerla ahí.
Muy bien.
Correcto.
Pues seguimos, vamos a dar paso al siguiente.
Vale, muchas gracias.