Buenos días a todos y bienvenidos a esta actividad de divulgación,
enmarcada en el 50.
Aniversario de la UNED, titulada nuevos horizontes de la microscopía.
Cómo ver lo invisible.
Mi nombre es Esther soy doctora, en Biología Molecular.
Actualmente tengo un contrato Margarita Salas
en la Universidad Autónoma de Madrid
y estoy realizando mi estancia completa aquí en la UNED,
en concreto en el departamento de física matemática,
decididos.
Por qué estoy ya dando este estatal actualmente?
Pues en los últimos cuatro años a pasar así si quieren,
en los últimos cuatro años he estado trabajando con microscopía
de súper resolución, una microscopía,
que si no tenéis muy claro que es ahora mismo
confío en que cuando termina esta charla lo podáis saber ponemos
muchas gracias vale pues como sabéis en el universo
en el que vivimos existen,
pues objetos con tamaños, múltiples diversos,
a escalas enormes, caras de enormes, pero nosotros en esta charla
lo que nos va a interesar son las escalas microscópicas,
nanos, tópicas llegando incluso a las atómicas.
Como vemos, esto vale el ojo humano sin ningún tipo de ayuda.
Es capaz de ver aproximadamente algo tan pequeño
como de cero con cero cuatro milímetros que es más
o menos el grosor estándar de un cabello,
pero qué pasa con aquellas cosas que son mucho más pequeñas
y que queremos ver también?
Pues para ello necesitamos herramientas.
Como los microscopios podríamos usar lupa,
pero se nos quedarían muy cortas y llegaríamos a unos pocos aumentos.
Sin embargo, con la microscopía vamos a ser capaces
de ver mucho más allá la microscopía.
Ha revolucionado la forma en la que vemos el mundo
a nuestro alrededor y ha desempeñado un papel crucial
en el avance de nuestra comprensión de la naturaleza.
Ha dado lugar a numerosos avances en los campos de la biología,
y la medicina, además de en otras áreas,
como la ciencia de los materiales,
además está es de interés de la ciencia
por una comprensión más profunda del mundo natural.
Nos ha permitido, mediante la microscopía,
precisamente, observar con un nivel de detalle antes inimaginable.
Como sabéis, hay varios tipos de microscopía,
pero por resumirlos un poco aquí vamos a distinguir
entre la microscopía óptica, la, con focal,
y la de súper resolución y la microscopía electrónica,
las tres primeras, la óptica, la con focal,
y la superior solución están basadas en el uso de fotones,
mientras que la electrónica emplea electrones
y vamos a explicar más adelante el por qué la microscopía óptica
está basada en el aumento por lentes ópticas,
es decir, basada en los trabajos iniciales
del y tiene multitud de aplicaciones en campos
como la Química la Física la geología la biología la medicina de hecho
como veis aquí uno de los ejemplos que puesto
es una muestra de histológicas que se usan ampliamente,
pues en anatomía patológica, diagnóstico, etcétera,
la microscopía con focal, por otro lado,
va a lograr nos dar un paso más allá en cuanto a la resolución.
Para ello también normalmente usamos la flores.
La excelencia también la podemos usar en microscopía óptica
con sería una microscopía convencional de priorizar,
pero desde don que micrófono me está guiando un poco,
pero en el caso de la convoca al lucro
vamos muchísimo más definición y detalle,
puesto que, aunque nosotros pensemos que nuestras muestras son muy finas,
siempre tienen un carácter tridimensional.
Esto quiere decir que toda nuestra célula
por poner el ejemplo de la célula, va a tener marcaje fluorescente,
y si nosotros queremos enfocar un plano específico que en el caso
de nuestras imágenes suelen ser bidimensional,
es deberíamos tener la capacidad de no ver la asistencia,
que estaría tanto por debajo como por encima.
Esto en microscopía óptica of les ya convencional
no lo podemos eliminar, pero en con focal,
conseguimos aumentar el contraste y eliminar esa luz,
desenfocada que vendría de otros planos en el eje eta
y que nos estaría de alguna forma impidiendo ver con más nivel
de detalle y más resolución.
Estas células.
Cuál es el nivel que podemos llegar a conseguir?
Pues el nivel de resolución que podemos llegar
a conseguir viene determinado por esta ecuación
y, por tanto, este nivel de resolución va a depender
de la longitud de onda, en este caso de longitud de onda nuestros fotones
y de la apertura numérica de nuestro objetivo.
La apertura numérica depende del ángulo entre el eje óptico
y la luz, en el extremo del diámetro efectivo,
del alenté y también del índice de difracción del medio
que tenemos en nuestra muestra,
y el objetivo este medio puede ser aire, agua o aceite
en en el caso de la longitud de onda.
Usamos luz visible,
como en estas tres primeras dos tipos de microscopía vamos
a tener una longitud que va desde 700 nanómetros hasta 400 nanómetros;
esto hace que aproximadamente podamos lograr un nivel de resolución
de en torno a 200 nanómetros.
Esto se debe al límite de atracción, de la luz visible.
Qué significa esto?
Si nosotros tenemos una muestra con dos moléculas
señaladas con Floro foros, es decir, limitado por excelencia,
vamos a ser capaces de detectar la señal fluorescente de ambos,
siempre y cuando estos estén a una distancia que no supere el límite
de la difracción de la luz, es decir,
en torno a esos 200 nanómetros aproximadamente.
De esta forma seremos capaces
de conseguir una imagen resuelta con dos moléculas identificables.
Pero qué pasa cuando tenemos dos moléculas que están mucho más cerca
entre sí?
Pues que estas estas señales de estancia van a sola y, por tanto,
vamos a poderlo interpretar únicamente como una única molécula,
cuando a lo mejor son dos o tres o cuatro o las que sean,
siempre y cuando estén mucho más cerca de este límite
de la infracción de la luz.
El problema de esto
es que nosotros estamos interesados en ver gran cantidad de cosas
que ocurren a un nivel muchísimo más bajo,
con un tamaño muchísimo menor de 200 nanómetros,
como pueden ser pues virus;
tenía proteínas moléculas diferentes,
estaríamos limitados por este, pues en sí límite,
como son nombre indica, de difracción de la luz.
Por eso en los últimos años la Ana nos copia,
ha avanzado enormemente, permitiendo la visualización de moléculas
por debajo de este límite.
Con qué técnicas?
Pues principalmente con dos microscopía de su pez, resolución
y microscopía electrónica.
Ambas van a ser capaces de superar este límite.
Vamos a empezar con la microscopía de su pez resolución.
Existen dos grandes grupos dentro de esta microscopía,
existen muchos tipos de microscopía en su resolución,
pero para esta actividad vamos a resumirlo en estos,
que ya son unos cuantos,
está la microscopía de, recomposición y la single mole que localice
y son macroscópicas.
Vamos a empezar por la recomposición y voy a ir hablando.
Es decir, este y gs sí o microscopía de iluminación estructurada,
se basa en el uso de un ctac con un, la serveis way CyL
que se ha insertado una rejilla de difracción móvil.
Interrumpiendo la trayectoria de la excitación,
esta microscopía puede sobrepasar el límite de resolución
por difracción más o menos consiguiendo unos 100 nanómetros.
Una de sus ventajas es que puede ser aplicadas sobre muestras preparadas,
conferencia convencional, es decir,
no necesitaríamos una preparación muy especial.
Podríamos usar las muestras exactamente igual que lo usaríamos
para convocar en este caso.
Otra de las ventajas
es que podemos podemos hacer más de un color a la vez,
incluso también podemos llegar a hacer más de una sección a la vez.
Esto es muy interesante y, además,
otra de las grandes ventajas es que podemos visualizar
células vivas.
No todas las técnicas de súper resolución
van a permitir esto.
El problema que tiene
es que se necesitan programas computacionales
de alto nivel para evitar la reconstrucción de artefactos
y, como he mencionado anteriormente,
pues se basa en el uso de una rejilla de difracción móvil
que interrumpe la trayectoria de la de excitación.
De esta forma
únicamente algunos rayos las cifras atados pasan a través del objetivo.
En el plano focal del objetivo,
estos rayos interfieren entre sí y crean una iluminación en franjas
con una intensidad que siga una onda sinusoide.
Este patrón de rayas de luz al superponerse con la muestra,
genera el llamado efecto muere este tipo de iluminación
estructurada genera patrones de organización de las moléculas
de menor frecuencia que los generados mediante iluminación homogénea
que es la iluminación que se utiliza en la microscopía convencional
estos patrones de frecuencia más baja son mejor captados por el objetivo
lo cual permite aumentar enormemente la resolución para conseguir
una imagen final súper resuelta se debe recopilar varias imágenes
adquiridas con diferente orientación de la iluminación estructural
y esto se consigue moviendo la rejilla de difracción
tanto en traslación como en rotación es decir
yo acabo de hacer desde aquí una animación
es un poco triste que solamente se ven desde pero realmente
esto debería moverse muchísimo más a rodeando de en cierta forma
toda nuestra muestra de interés pasamos a la siguiente técnica
que es la estimule emisión de presión macroscópica
para los amigos este esta es una de las técnicas más empleadas
esta técnica emplea la desactivación selectiva de Floro foros
lo cual minimiza el área de iluminación del punto focal
y a su vez aumenta la resolución este consigue aproximadamente
una resolución ya de 30 a 80 nanómetros
y funciona mediante la citación de un punto
mientras de activa su alrededor para eso usa un lado
ser equipado con una de agotamiento adicional
con un perfil de identidad en forma de donuts.
Si veis aquí en la diapositiva,
en el centro digamos el apartado b, veis que tenemos dos láseres,
una habitación y otro de excitación o de elección.
Nuestro enlace de excitación tiene
un diámetro que es lo más afinado que hemos podido conseguir,
pero no llega a ser diámetro muy muy fin.
Lo que se consigue con esto
es que al emplear a la vez un enlace de excitación
los plumeros pueblos de alrededor no van a emitir flores; tenencia;
y vamos a conseguir como veis aquí abajo
pues un diámetro de excitación; muchísimo menor.
Este las ves de perdón, de deleción; tiene además un perfil de identidad
en forma de donuts que lo veáis a lo mejor un poquito mejor;
a la izquierda del todo, que es lo que consigue como digamos afinar.
Es enlace de excitación como podéis ver
en la animación que puesto pues solamente aquellos;
fueron foros que estuvieran excitados por la;
el puntito verde tenían los que estarían emitiendo flores,
ciencia, y eso es lo que hace que consigamos una resolución mayor.
Mientras vamos barriendo la muestra, como podéis ver en el ejemplo,
aunque quizá no es la mejor imagen,
lo que tendríamos es que pasaríamos de una imagen way fil,
es decir, microscopía convencional,
en la que no distinguimos prácticamente nada a una imagen
donde ya podemos distinguir perfectamente las cosas,
y ya os digo que nos de las mejores que ya.
Actualmente se ven unas pasadas.
Otra de las técnicas es el grado de esta depresión, macroscópica o gs
-de esta técnica es muy parecida a la anterior.
De hecho, desde mismo creado es otro de los métodos de recomposición
que supera este límite y emplea en este caso diferencia
a los anteriores marcadores fluorescentes,
que se mueven entre dos estados,
el luminoso umbrais y el oscuro o dar;
esto quiere decir que necesitamos unos foros especiales
de alto rendimiento
y además la muestra debe estar en ausencia de oxígeno.
Esto se consigue con bajes como el movió
o el ve casi sede.
Es un método que como he dicho, es muy parecido al este,
pero que va a usar únicamente una longitud de onda
tanto para la excitación como para la depresión,
pero funciona muy parecido, citamos nuestros logros pueblos,
pero finalmente se lo vamos a ver a aquellos que están en el.
En el Ridao, con esto ya pasamos a la siguiente grupo de técnicas,
que serían las mole que localice y son macroscópicas estas técnicas
engloban precisamente un conjunto que logra llegar a la;
supera solución,
por medio de medidas muy precisas, muy precisas,
de la posición de emisores individuales.
Y vamos a ver un poquito cuáles está, pues como recordáis,
tenemos el límite de difracción, de la luz con dos moléculas
o primero por los demasiado cerca entre sí como para resolverlos.
Cómo podemos distinguir esto?
Otra forma de distinguirlo sería una separación temporal
de esta prevalescencia,
podríamos tener primero un Floro fuera emitiendo
y luego el otro tomaríamos la imagen de 1,
después la del otro.
Y qué pasa si sumamos ambas imágenes que de repente tenemos
una imagen final, donde somos capaces de distinguir ambas moléculas,
esto todavía lo podemos afinar mucho más cómo mediante la point
fashion la interpretan, misión o la función de dispersión puntual,
refleja el hecho de que un punto matemático de luz
en el plano del objeto se extiende para formar un área finita.
En el plano de la imagen, en el caso de la microscopía,
de súper resolución, el uso de rayos láser hace que la puentes expansión,
se pueda modelar matemáticamente utilizando los conceptos de haces
auxiliados.
No toda la iluminación nos va a permitir usar digamos
de esta simulación Louisiana
pero usándolas eres sí que lo logramos
y auxiliando bastante simétrico de esta forma.
Podemos localizar con mucha precisión prácticamente con coordenadas
la oposición si de nuestro objeto, en base a la intensidad de la flora,
existencia en el caso de nuestro ejemplo
pues conseguiríamos localizarlo.
Pues estos dos puntos que vemos aquí y tendríamos una imagen final
resuelta de este tipo.
Antes de continuar con las técnicas
también me gustaría hablar un poco de los primeros foros especiales
que usamos, como a lo mejor recordáis.
Hace un momento hemos hablado de que gs, de necesitan flor
o forense especiales.
Pero estas técnicas también tenemos varios tipos de flores.
Pueblos los que son foto activables,
que pasan de un estado oscuro a un estado.
Un ominoso brain como lo queráis llamar,
una vez que son explotados con enlace loro, fueros; foto convertibles,
que son los que cambian de color una vez son necesitados con enlace
y Floro vuelos, otro sui chabola o foto convertibles
que pueden.
En cualquier caso, pueden pasar de oscuro
a luminoso o de un color a otro, una vez son excitados,
pero tienen la característica de que esto es revertible
a su estado anterior.
Vamos a pasar ahora a hablar de estas técnicas de pan.
Esto y están también bastante
empleadas, todas empezamos con voto activa
iter, localice y son macroscópicas o pan,
es una técnica que se emplea para visualizar
sobre todo proteínas fluorescentes.
Esto quiere decir que hemos hecho mediante ingeniería genética,
proteínas que son capaces de emitir flores, ciencia
o que están acopladas a un foro
fueron que nos permite esto.
Esto nos permite algo muy importante.
Nos va a permitir visualizar células vivas.
Esta es la única técnica dentro del siglo inmole,
que un localista,
y sin macroscópica que nos va a permitir ver células vivas
las otras.
Tanto estoy como necesitamos una fijación previa,
evidentemente ya no nos va a permitir tener las células vivas,
funciona de una manera bastante sencilla,
dentro de lo que cabe, que es que empleados la seréis.
Como veis, aquí primero emplea un enlace de activación,
que suele ser normalmente el cuatro o 5,
los foros solo algunos de ellos van a activas,
también se debe al va fer, que emplea la muestra después,
un lapse de lectura, o Ridao,
que suele ser el harvoni on va a finalmente activar;
las ciertos, fueron los que van a emitir,
fluorescente ya está proexistencia,
se va a mantener durante un tiempo suficiente
como para localizar con precisión estas moléculas,
por la point mansión lo calificaríamos, sus coordenadas,
pero esta presidencia se acaba agotando mediante foto blistin
por seguir estando, dando con enlace
y se apagan.
Una vez pasa esto,
volvemos a estimular con enlaces de activación,
y volvemos a repetir todo el ciclo con el hacer de lectura,
y vamos captando moléculas a moléculas.
Esto no se hace como a lo mejor vemos en esta imagen que solo tenemos 3.
Esto ocurre con millones de puntos a la vez,
lo cual es muchísimo más óptimo,
pero el problema que podríamos llegar a tener es que,
como veis aquí también no vemos con más detenimiento,
pero aunque esta técnica logra un nivel de resolución
ya entre 10 20,
nanómetros en el caso de muestras vivas, serían en 40 nanómetros,
uno de los inconvenientes.
Es que es muy sensible a la señal de fondo
esto hace necesario que las muestras sean muy delgadas
y de vez en cuando puede suponer un incremento en el tiempo de toma
de imágenes, lo cual puede ser un problema puesto
como estamos usando las series de alta intensidad.
Esto es la serie a lo largo del tiempo
pueden acabar dañando nuestra muestra y en el caso de células vivas
pueden producirles un año celular que estaría estropeando
nuestro experimento.
Además también incrementamos el tiempo.
Corremos el riesgo de que nuestra célula viva
o nuestro proceso de interés se mueva o pase algo,
y nuestro plano de foco,
que es realmente lo que nosotros queremos ver,
pues se nos pierda.
Otra de las técnicas también muy empleadas,
es la estocadas.
De óptica al reconstrucción macroscópica,
conocida como estor, esta técnica está basada
en la capacidad que tienen algunos, pero foros de entenderse
y apagarse repetidamente.
En lo que se conoce como linking o foto parpadeo,
es decir,
que van a pasar de un estado de oscuro un estado luminoso,
una y otra vez, pues semejante a un parpadeo.
Este proceso se puede dar mediante 2,
las eres o mediante el uso de un único,
la se están originalmente empleaba dos láseres,
como lo que dice ahora en la diapositiva,
pero actualmente se realiza con más frecuencia
lo que se conoce como da aire, texto en el que se utiliza únicamente
un las técnicas bastante sencilla.
Tenemos nuestra muestra, el primer, el primer pulso
del a ser más o menos nos consigue apagar la mayoría de Floro foros;
esto también se consigue ya que la muestra está en un,
va fer especial también en ausencia de oxígeno
y a medida que va pasando el tiempo solo algunos de los pueblos
van a ir vendiendo de forma estocásticas,
es decir, de forma arbitraria y van a ir haciendo un parpadeo.
Esta activación, estocásticas aleatoria de los primeros foros,
permite la separación temporal de moléculas individuales,
lo que nos va a permitir un ajuste
Louisiana de alta precisión de cada fueron,
pero como ahora mismo estamos hablando de visualización,
creo que lo mejor va a ser ponerlos.
Un ejemplo aquí tenemos nuestra Torre Eiffel
a la izquierda del todo tendríamos,
pues nuestra señal parpadeo ante de distancia.
En este caso proexistencia, pero bueno ya sabéis
que la aterricé la esto por las noches
en el centro estaríamos localizando cada una de estas partículas,
mediante nuestro point expansión, y a la derecha
del todo estaríamos reconstruyendo todas ellas, sumando las puntas
y visualizando la torre Eiffel al completo.
Tengo también la suerte de que me han cedido estas imágenes
para que lo veáis en células en este caso
estaríamos visualizando una célula en el que se ha marcado
y le venía ibais viendo a la izquierda
lo que estaríamos observando en el microscopio.
Mientras tomamos la muestra, en el centro
estaría cómo se van localizando cada una de las moléculas,
pues la puente mansión y a la derecha del todo
sería la reconstrucción final.
Esta reconstrucción no es una imagen,
realmente es la indemnización de una matriz de coordenadas
que se han ido obteniendo.
Por qué es importante esto?
Pues están estos niveles de resolución.
Esta técnica también llega en torno a los 10, 20 nanómetros
y en el caso de imágenes en tres D,
que también se pueden tomar, llegaría en torno a los 50.
Es importante,
porque hay veces que queremos visualizar moléculas muy pequeñas,
como en el caso de la cromática, en este caso vemos
que la tomatina si utilizáramos una residencia convencional,
no veríamos absolutamente nada, pero, una vez que usamos la esto,
vemos la tomatina bastante bien, vemos los placeres,
vemos las historias y vemos cómo funciona todo.
Antes de pasar a la tercera técnica,
me gustaría repasar brevemente las diferencias entre pan,
y esto es porque, a lo mejor,
ahora mismo nos han parecido bastante iguales,
pero tienen unas diferencias claras, aunque ambas son de su,
perder solución pan.
Se realiza utilizando Floro foros que se expresan
de forma exógena en forma de construcción,
de fusión de proteínas fluorescentes,
foto activables en el caso de estos.
Solemos usar anticuerpos unidos
-afloró foros.
Estos anticuerpos,
unidos afloró por esta parte de ser un poco más flexibles,
en cuanto a lo que podemos visualizar también dan una flor
excelencia más intensa.
En ambos casos los primeros foros, son conducidos entre un Estado
entendido y apagado.
Pero en el caso de pan, si os acordáis la foto activación
una vez que empieza a mi tiple excedencia
se produce de forma ininterrumpida
hasta que ese otro cliché y por tanto, esta paga,
pero para esto es lo que nos interesa,
es que se enciende y se apague cuantas más veces mejor,
y cuanto más tiempo dure, antes de agotarse,
porque eventualmente claro también se agota,
pues me formé solución y mejores imágenes,
obtendríamos vamos a pasar a la última bueno,
y también se me olvida mencionar
que, obviamente una se puede hacer en células vivas,
y esto no se puede hacer de momento en células vivas.
La siguiente es la punta como ley, se nos ponía allí y nanos
que el topográfico también conocida
como ven esta técnica está basada en las flores ciencia estocásticas
de una sola molécula, mediante unión y desunión molecular;
y este método es básicamente.
Como veis, aquí son unas sondas,
flores de que están emitiendo fluorescentes constantemente,
pero están libres en el medio,
donde vamos a tener nuestra muerta.
Entonces, lo que acaban haciendo ver de conocer con las uniones típicas
a las que se van a unir de forma temporal se unen de forma temporal,
y se de su esto tiene bastantes ventajas.
Esta unión temporal lo que hace
es aumentar el número de fotones que vamos a tener en ese punto,
y es lo que vamos a captar cuando no están unidas
se mueven bastante rápido y, además se puede mover
fuera de foco, con lo cual su flor existencia la podemos descartar
si en esto me estábamos haciendo imágenes muy rápidas
como teniendo una película.
Cómputo dramas, muy muy cortos en este caso hacemos un poco
lo contrari.
Hacemos imágenes de una exposición más larga,
porque nuestro interés es encontrar puntos de flores,
ciencia más definidos,
como cuando hacemos votos de larga exposición,
que solo se ve pues aquellas luces que se han mantenido, quietas
y las que no, pues se ven mucho más difusas
como es un poco difícil de explicar.
He preparado esta animación para que más
o menos lo entendáis tenemos nuestras ondas fluorescentes,
que van libres por el medio
hasta que encuentran su sitio de unión.
Se unen temporalmente ahí y nosotros lo captamos
y por la puentes expansión podemos de ver
en qué sitios se están.
En concreto estas estas sombras.
Se van a desunir, se van a volver a ir al medio
y se van a unir unas nuevas a sitios nuevos.
Volvemos a captar donde están cada una y esto pasa
una y otra vez hasta que finalmente conseguimos tener todos los puntos
y, con ellos, rentabilizar una imagen final
es también señalable que esta técnica se utiliza mucho conocida como DNA,
en el que las ondas que se usan y los sitios de unión
son realmente mediante.
Venía.
Bueno con esto hemos visto las principales técnicas
de microscopía a su vez resolución y cerramos con estas
las técnicas que usan fotones, vamos a pasar ahora
a la microscopia electrónica y, bueno, como todos sabéis,
el primer microscopio electrónico fue diseñado por Rusca
y no entre 1925 1932.
Hace casi 100 años, pero desde sus inicios,
aunque avanzado mucho, la teoría sigue siendo la misma.
La microscopia electrónica no usa fotones que sí que hemos visto
que las estamos usando en las técnicas anteriores,
sino electrones.
Por qué?
Porque las técnicas que usan fotones
están limitadas a la longitud de onda de los mismos,
que, como vemos aquí otra vez está entre 280.000 nanómetros.
La resolución máxima b,
depender tanto de esta longitud de onda
como de la apertura numérica, por lo que una forma
de mejorar esta resolución máxima sería disminuir la longitud de onda.
Como ya sabemos, los electrones son partículas,
pero son ondas.
Al mismo tiempo tienen esta dualidad onda partícula
y si conocemos que, mediante fotones lograríamos como mínimo
una longitud de onda, unos 400 nanómetros.
La longitud de onda de un electrónico es muchísimo menor.
De hecho, mediante esta ecuación se puede calcular
que la longitud de onda un electrónico en el vacío
puede variar de entre 0, como aún nanómetros,
hasta una milésima parte de este tamaño.
Por lo tanto, vemos que debido a que la longitud de onda
los electrones es bastante menor que la de los fotones,
los microscopios electrónicos consiguen alcanzar resoluciones
mucho mayores, las de incluso a los 50
con metros que es una resolución unas 4.000 veces mayor
que la de un microscopio con foca, un dato importante antes de continuar
con la microscopia electrónica es que al emplear electrones
los sistemas del vidrio ya no nos vale,
los microscopios deben tener unos campos magnéticos moldeadora
para formar sistemas de ópticas electrónico, electromagnéticas.
La microscopía electrónica también tiene sus propios retos
y limitaciones, entre ellos vamos a destacar estos 4.
El contraste de amplitud,
que radica en la naturaleza por muscular de los electrones,
se debe al contraste del difracción, provocado por la pérdida
de electrones de la es especialmente relevante
cuando estamos visualizando muestras gruesas,
el contraste de pase,
que radica en la naturaleza ambulatoria de los electrones,
se debe al contraste de interferencia provocado por los desplazamientos
de las bases relativas a las porciones del rayo,
especialmente importante cuando estamos visualizando muestras minas.
Luego también tenemos, como otros microscopios,
que también tienen todos sus aberraciones del ente.
En el caso de electrónico contamos con las dogmática,
las bélica la cromática y i coma
y el problema de la función de contraste
-ctc, que es bastante conocido que describe la respuesta
a un sistema óptico,
a una imagen de compuesta en ondas cuadra éticas,
también existen dos problemas principales respecto
al material biológico que son el entorno de vacío,
y la transferencia de energía, dependiendo del tamaño
de la muestra, se puede resolver de dos formas.
En muestras grandes, con muestras pequeñas,
muestras grandes sería por fijación química,
o creo, fijación por inclusión en resinas
o prion sustitución o por réplica metálica,
soluciones pequeñas podrían ser porque inciden negativa.
Los agentes de tintero más usados,
suelen ser en Bolívar todo armónico.
El fósforo estatus o dedico y sales durante o como hace Tato,
conforme a que son todas ellas capaces de interactuar
mínimamente con la muestra, son muy estables en la interacción
con los electrones, además, altamente insolubles en agua
presentan una densidad que favorece contraste.
Esto va a ser muy importante y además tienen un punto de fusión alto
y un tamaño de grano pequeño.
También podemos utilizar réplicas metálicas que, para construirlas,
normalmente se evapora metal normalmente estaño,
que se ven cositas sobre la muestra y está al estar al vacío,
se va desintegrando o muestras vitrificados por creo.
Fijación, la fijación es una de las técnicas
más empleadas actualmente y lo vamos a ver más adelante
y básicamente consiste en congelar una muestra de forma tan rápida
que se forma hielo, amorfo y el Ovidio
dentro de la microscopia electrónica.
Creo que todos conocemos un poco, que existe,
la microscopia electrónica de barrido hora microscopia
electrónica de transmisión, empezamos por la de barrido;
en la microscopia electrónica de barrido la muestra,
se recubre con una capa de metal delgado.
Para hacerla conductora, los electrones la muestra
recubierta es barrida por un haz de,
electrones enviados desde un cañón el detector
mide la cantidad de electrones reflejados por la muestra,
finalmente generando imágenes donde el relieve muestre la actriz
dimensionalidad de esta muestra,
como vemos en este ejemplo de granos de polen,
la preparación de las muestras biológicas para microscopia
electrónica, barrido va a depender del tipo de muestra,
podemos tener muestras muy resistentes
como insectos desecados, esos plumas cáscaras de huevo,
conchas, etc. Que van a necesitar un procesamiento mucho menor
que muestra es mucho más sensibles, apenas que está un poquito acatarla,
que como pueden ser las células o tejidos
que van a necesitar un procesamiento un poco más largo.
Estas muestras, menos resistentes requieren una fijación química previa
que preserve y estabilice su estructura.
Esta fijación se puede realizar con lucrarán, leído,
que a veces también se combina con formaldehído
u otros fijadores.
En algunos casos se realiza una fijación.
También onte tra óxido de os, una vez fijada nuestra muestra,
se desiderata normalmente reemplazando
el agua por solventes orgánicos como el etanol o la acetona,
porque evidentemente, si retiramos del agua,
nos quedaríamos sin el volumen de la célula,
y nuestra muestra de repente cambia totalmente esto.
La muestra se suele montar en un estu, usando como adhesivos
-resina epoxi o cinta adhesiva de doble cara,
eléctricamente conductora, gracias a esto,
cubrimos nuestra muestra con oro o una aleación oro
-palacio antes de examinarla las microscopio
como veis, por ejemplo con esta araña,
ya en el microscopio, se emite termo irónicamente,
unas electrones desde el cañón de electrones
equipado con nunca todo decir,
lamento de no cuando las electrones primario interactúa con la muestra
los electrones pierden energía mediante dispersión
y absorción aleatorias,
repetidas dentro del volumen que veis aquí a la derecha, que es un volumen
en forma de lágrima conocido, como volumen de interacción,
es un volumen que, como veis, está dentro de la muestra
como resultado del intercambio de energía.
Entre el haz de electrones y la muestra
se dan la reflexión de electrones de alta energía mediante dispersión
-inelástica.
La emisión de electrones secundarios mediante dispersión,
inelástica y la emisión de radiación electromagnética
cada una de ellas se detecta con detectores especializados
que he señalado en la parte izquierda de la diapositiva.
La imagen resultante es un mapa de distribución de intensidad
de la señal que se emite desde el área escaneada
de la muestra aquí como ejemplo, pues la araña que supuesto
anteriormente que es estar año cebra.
Su resolución se encuentra entre tres 20 nanómetros dependiendo
a veces del tipo de microscopio y de la técnica ampliada.
Al contrario que la microscopía de transmisión la magnificación
por microscopía de barrido no depende de la lente del objetivo
sino que va a depender de que el haz de electrones tenga un diámetro
lo suficientemente pequeño.
En resumen, con la microscopia electrónica
de barrido se obtienen imágenes a detectar; pues perdón,
todas que no se ve; bueno, pues la parte de arriba de,
de nuestra, nuestra gotita de interacción.
Todas estas señales
se pueden detectar mediante microscopía de barrido
y todas ellas pueden acabar dándonos lugar a la imagen final.
Mientras que en la microscopia electrónica de transmisión
que se ve hay un poquito en verde.
Claro, nosotros vamos a obtener,
digamos, nuestra imagen a partir de todas aquellas misiones
que sean que se deban,
a las que hay los electrones que son capaces de atravesar la muestra,
la microscopia electrónica de transmisión
es una técnica que se basa, evidentemente,
la transmisión de electrones a través de una muestra
para formar la imagen.
Por lo tanto, el requerimiento para esta microscopía
es que las muestras sean muy finas y normalmente no lleguen
ni a 100 nanómetros.
La microscopía electrónica de transmisión es capaz de devolver
una extraordinaria variedad de información
con resolución nanométrica, incluso atómica en algunos casos.
De hecho, algunas técnicas nos permiten llegar
no solamente a revelar dónde están los átomos,
sino también qué tipo de átomos son y cómo están unidos entre sí.
Sí aquí, por ejemplo, os he puesto dos ejemplos así más convencionales,
el de un ámbito con de a y al lado,
pues tendríamos nuestro famoso coronavirus gracias
al alto nivel de resolución en la microscopía electrónica
de transmisión,
la consideramos una herramienta esencial para la nanociencia,
tanto en el campo de la biología,
como en el campo, los materiales y la física,
para preparar muestras de alta calidad.
Se debe llegar a un espesor, comparable al camino libre,
medio, de los electrones que viajan a través de la muestra,
es decir, como hemos dicho antes unas pocas decenas de nanómetros,
la preparación de estas muestras es un poco complicada
pero depende del material a visualizar,
y de la muestra empleada para muestras biológicas
se puede emplear una resina que permita resistir
al vacío dentro de la cámara y de microscopio
y un corte en secciones muy delgadas transparentes a los electrones.
Las muestras se pueden teñir usando material distinción negativo,
como hace tanto dura, de una;
ni lo o Tetra óxido de os una de las técnicas
más empleadas últimamente;
para preparar este mínimo grosor de muestras
es el hay un mailing o el foco es,
hay un bien que utiliza una de iones,
normalmente da lio finamente, enfocado y a corrientes altas,
que permite el laminado específico de una parte de la muestra.
Como veis aquí en la parte derecha de la diapositiva
lo que vemos es esa muestra fina
que se ha obtenido.
Tras este laminado con el enfoque hay un vi o film,
los microscopios de transmisión contienen una fuente de emisión
o casi todo, que puede ser un filamentoso obsceno,
un mono cristal de sabor,
adelanta no un cañón de emisión de campo.
Este cañón está conectado a una fuente de alto voltaje
de entre 30.000 kilovoltios
y emite electrones mediante la emisión termo irónica
o de campo al vacío.
El haz de electrones después de salir del cañón,
normalmente se acelera hasta alcanzar su voltaje final
y entrar en la siguiente parte del microscopio, que es el sistema
de lentes del condensador.
Este sistema de lentes de condensador enfoca aún más el haz de electrones
al tamaño y ubicación deseados.
Dentro de la muestra, el desplazamiento de la de electrones
se debe a la interacción con los campos magnéticos
y electroestática, las lentes de un microscopio de transmisión,
son lo que le van a dar la flexibilidad de funcionamiento
y la capacidad de enfocar haces a escala atómica.
Una lente suele estar hecha de una bovina o solenoide,
casi rodeada por materiales, pero magnéticos diseñados
para concentrar el campo magnético de la bovina.
En una forma precisa y confinada,
a diferencia de las lentes de vidrio, las lentes magnéticas
pueden cambiar fácilmente su poder de resolución
ajustando la corriente que pasa a través de las bobinas.
Normalmente los microscopios constan de tres tipos de lentes,
las lentes condensador que son responsables de la formación
de la primario, las lentes objetivo
que enfocan en la que pasa a través de la muestra y las lentes;
proyectos que se usan para expandir el;
la sobre el dispositivo de imagen, su resolución es entre uno
20 nanómetros,
pero algunas técnicas englobadas dentro de la microscopia electrónica
de transmisión pueden llegar incluso a los 0, con cero cinco nanómetros,
es decir, estaríamos ya entrando en la escala atómica.
Dentro de estos dos grandes grupos de microscopía electrónica
existen varios tipos de microscopía.
Vamos a destacar entre ellos la canina transmisión electro
-macroscópicas que, como veis,
lo que hace es combinar ambas, la microscopía electrónica de barrido
cuando la transmisión y esto se consigue o bien añadiendo
un sistema de escaneo a un microscopio de de transmisión
o añadiendo un transmisiones y detectores
a un microscopio de barrido.
Entro ya del grupo exclusivamente de transmisión,
tendríamos microscopía,
lo voltee crío them Institute y Hyde,
temperar tu instituto.
Para no hacer esto muy confuso, nos vamos a centrar
en una de las técnicas que más está usando últimamente,
que es creo, día, temo, crío Vivent
es la microscopia electrónica criogénica,
también existe esta microscopía para microscopía de barrido,
pero en este caso nosotros no nos vamos a centrar
en la de transmisión;
se refiere a toda microscopia electrónica,
en la que la muestra se encuentra preservada en hielo
vidrio a menos de bueno, a menos -180º,
grados, lo cual es una pasada esto confiera unas ventajas
sobre las otras técnicas,
especialmente para el punto de preparación de la muestra,
ya que no va a requerir fijación decidir, datación,
o el uso de polímeros o resina,
sino que simplemente se congela rápidamente en un proceso conocido
como vitrificación.
Esto permite que las estructuras nativas
de la célula se mantengan prácticamente inalteradas,
lo cual va a mejorar la resolución y también,
pues si tenemos mejor resolución,
necesitamos menos imágenes, menos número de muestras,
menos tiempo para conseguir la congelación de la muestra.
Podemos usar dos técnicas.
Diferentes.
Hay precios phishing o planes;
en Hyde Encín se utilizan planchas,
que se pueden llenar con nuestra muestra,
y el creo protector y se congelan a alta presión,
lo cual produce una muestra relativamente gruesa en estos
términos, que debe cortarse por métodos.
Como los anteriores, vistos por ejemplo, film,
se puede emplear esto en células pequeños.
Organismos, Órgano y de tejidos,
órganos siempre que sean láminas de menos de 200,
micrómetros, planes pricing utiliza rejillas que se pueden sumergir
en etanol líquido para producir una capa fina
y admite únicamente muestras de un grosor muy fino,
menos de 10 micrómetros pueden ser como pueden ser células o partículas
individuales;
en algunos casos puede ser recomendable.
La abstracción de la amelia también de estas muestras,
la microscopia electrónica criogénica consigo una resolución casi atómica,
pudiendo llegar incluso hasta tres por ello,
rivaliza con la cristal geografía y rayos equis
en el estudio de la estructura tridimensional
de las moléculas dentro de la microscopía criogénica
encontramos la tomografía electrónica, criogénica,
llamada crío eti, esta técnica derivada
de la microscopia electrónica de transmisión.
Como veis aquí y consigo una resolución
ya entre uno cuatro nanómetros pero además a nivel tridimensional
para estructuras que están presentes
pero para ello se sacan imágenes de las muestras
mientras estas se inclinan y se rotan respecto a la de electrones
aproximadamente entre menos -60 más 60º.
grados.
Esto resulta en una serie de imágenes, 2,
del que se pueden combinar computacional,
mente, hasta producir,
una reconstrucción tridimensional para estructuras que están presentes
múltiples copias.
Pongamos que tenemos varias partículas o varias moléculas
o que están en varios tomo dramas.
Se pueden llegar incluso a resoluciones
por debajo de un nanómetro mediante el suc.
Tomo gran haber aquí que combina computación hábilmente,
imágenes de objetos idénticos para mejorar la señal ruido,
para mejorar la relación sin el ruido.
Gracias a ello se pueden conseguir imágenes
como las que veis aquí uno de los principales retos
de que yo he de y prácticamente de todas
las microscópicas en las que necesitemos usar la melas muy finas,
es la localización de estructuras de interés dentro de entornos
complejos y grandes;
es decir, nosotros tenemos una célula,
pero vamos a realizar.
Al final, vamos a tomar una parte muy pequeña,
y si nosotros estamos interesados en procesos dinámicos
o procesos que ocurren en sitios muy específicos,
o incluso no tienen por qué ser tan así pero queremos ver el Goiry,
queremos ver un virus no sabemos exactamente dentro de la célula.
Dónde está?
Qué podemos hacer para mejorar esto y no estar haciendo imágenes
de todo.
Hasta eventualmente encontrarlo es una solución,
es aplicar la microscopía de excelencia,
tanto la óptica como la de súper resolución,
y así surgen dos tipos de microscopía.
Creo que y creo pan, vamos a simplificar las cosas,
y vamos a hablar únicamente de creo client,
pero tienen varias cosas en común.
De hecho,
ambas técnicas es lo que hacen es que lo primero es congelar la muestra,
que contiene ya la molécula de interés
marcada con flores fluorescentes la muestra congelada,
se visualiza para localizar la ubicación de la señal fluorescente,
y, sabiendo dónde está, se extrae la lamela de, esta zona localizada.
Esta dámela se transfiere al microscopio de transmisión
para obtener las imágenes en alta resolución
mediante la tomografía.
Creo que se ha convertido en una herramienta poderosa
en este campo que permite estudiar estructuras
de las moléculas de alta resolución, preservando además su estado nativo;
creo plena ha supuesto un gran avance en el mundo de la microscopía,
ya que permite la inserción,
la intersección de las ventajas de dos técnicas muy potentes
que se la microscopía de flores, ciencia y la tomografía electrónica,
cerrando así una brecha que existía entre estudios estructurales
y a veces estudios de funcionalidad o estudios moleculares y celulares.
Además, esto permite que podamos visualizar eventos efímeros
y dinámicos que de otro modo serían muy difíciles de captura
para crío en uno de los aspectos más importante,
va a ser, por tanto, realizar, preparaciones de muestra
que permitan tanto la visualización con microscopía flor ciencia
como la tomografía electrónica crónica.
Por tanto, también uno de los retos principales
es mejorar la manipulación de muestras durante el mecanismo
de transferencia entre uno otro, y poder obtener así
una buena correlación entre los resultados.
Este desafío se puede superar
mediante el uso de marcadores industriales o pero las flores,
que sean visibles en ambas modalidades,
y así poder ajustar, digamos, una sobre otra y con relacionarlas.
Otro de los desafíos también podría
ser la disponibilidad de equipos adecuados,
aunque este en el caso tanto de técnicas de súper resolución
como de técnicas electrónicas creo que es algo común,
porque son equipos muy caros y que no suelen estar
en todos los institutos de investigación, por tanto,
ha revolucionado la forma que tenemos de visualizar procesos biológicos,
pero también interacciones moleculares,
procesos de muchos tipos, no es simplemente en biología.
Al combinar el poder de la microscopía electrónica,
criogénica con la microscopía óptica correlativa.
Creo que también nos permite capturar imágenes
de alta resolución de células y tejidos en su estado natural.
Esto ha llevado a una mejor comprensión
de procesos complejos,
como pueden ser las interacciones entre proteínas
la señalización celular, interacción entre virus y huésped
y, por tanto, pues logramos de esta forma
sacar lo mejor.
Que podríamos sacar de la microscopía de flores.
Ciencia, identificar proteínas, identificar zonas
y sacar lo mejor de nuestra microscopia electrónica,
donde coincidimos una resolución prácticamente atómica
y podemos ver la estructura de cada molécula que nos planteamos.
Una de las aplicaciones más interesantes de creo
que últimamente está siendo el descubrimiento de fármacos
o lo que se conoce también como de lactis cobert
al utilizar, creo creen para visualizar imágenes,
interacciones entre fármacos y dianas a nivel molecular;
podemos identificar nuevas dianas farmacológicas
y desarrollar tratamientos más eficaces para enfermedades.
Además, creo que tiene un potencial de revolucionar el campo
de la biología estructural al permitirnos estudiar
la estructura tridimensional de moléculas en su entorno natural.
Como último apunte, quería mencionar una técnica nueva
que realmente no puedo englobar en las anteriores,
pero han ser bastante moderna.
Merecía la pena que es la microscopía de fuerza atómica,
la microscopía de fuerzas atómica
o microscopía de fuerza de barrido; es un tipo de microscopía,
de sonda de barrido de muy alta resolución;
tiene una resolución demostrada del orden de fracciones de nanómetros
y, además tiene unas tres capacidades principales,
que es la medición de fuerza, imágenes topográficas
y manipulación.
Resumiendo mucho, este método se basa en la utilización
de un pequeño volatilizó, el que hizo allí en azul o plantilla
conformada y resorte que tiene una punta afilada
en su extremo libre.
Esta punta se pone en contacto con la muestra
y va cambiando la muestra.
La interacción de la punta con la muestra
es un evento a escala atómica, pero se traduce en movimientos
del volatilizó, que son eventos a macro escala varios detectores
van a registrar la desviación y el movimiento del voladizos,
que muestra la topografía de la superficie de la muestra,
y estas señales que se registran mediante Plura
que se registran mediante estos detectores
van a ser tratadas mediante programas especializados,
y se va a tratar una imagen aseguro color en la que cada pixel
representa una posición de coordenadas y crisis de la muestra
y el color representa la seña grabada con esto y así cerramos
todas las técnicas de microscopía, que nos permiten ver
lo invisible y concluimos que todas las técnicas que hemos visto hoy
son poderosas herramientas
que nos permiten comprender mejor la estructura y función
de las moléculas biológicas a nivel nanométrico.
Gracias a ellas conseguimos la capacidad
de estudiar procesos dinámicos con una gran precisión.
Las aplicaciones de estas tecnologías son numerosas
y abarcan diversos campos como el descubrimiento de fármacos
la neurociencia biología estructural celular
entre muchísimos otros a pesar de los desafíos enfrenta,
cada te imita.
El potencial para el futuro desarrollo del campo,
de la microscopía a escala nanométrica es inmenso,
y la capacidad de revolucionar la forma que abordamos
la investigación científica.
Con este Anselma me queda daros las gracias por venir
y si tenéis alguna pregunta,
a pesar de que ha sido muchas técnicas una detrás de otras.
Si tienes alguna duda, por favor, me voy a preguntar
que los responderé.
Lo mejor que pueda, que yo tampoco soy experta en todo.
Muchas gracias.
Espera que creo que detraen un micrófono, un público bueno,
estamos en hora punta de recepción.
Está entendido, vale una pregunta, requetés básica
y las técnicas de microscopía con fotones, que has comentado,
que son muy variadas.
Cada una de ellas necesita un tipo de microscopio
o con un tipo de microscopio.
Puedes adaptar que a varias de ellas es ejemplo en las técnicas, que son
sin el Monique un local de disensión.
Yo personalmente sí he logrado hacer más de una técnica
con el mismo microscopio, por ejemplo.
Yo he podido hacer esto y con los mismos microscopios,
porque muchas veces es que tengas la capacidad
de registrar esas partículas en el momento exacto
como suelen tener software que te permiten indicar
cuántos milisegundos; vas a tomar la imagen, todas esas cosas,
siempre y cuando tú tengas una buena cámara
que sea capaz de capturas.
Rápidamente las cosas son bastante flexibles,
pero a lo mejor en el caso este siempre tendrían que tener,
pues vamos por técnicas similares.
Como esto,
como lo que estoy comentando, sin el mole que localice
y sin macroscópicas podrías hacerla, me parece, por ejemplo que lo tendría
es un poco más difícil por el tipo de láser,
pero las otras dos que van a utilizar más o menos los mismos las eres
que valdría luego hay microscopios más completos
y algunos que son muy pequeñitos realmente y son como muy al punto.
El problema es un poco lo que comentas, que es
verdad que como es bastante caro un aparato de estos
es una pena que no pueda ser que puedas hacer todo,
pero hoy no podrías combinar.
Vamos por tener un este que tiene un rayo de precio en un rayo de tal
con a lo mejor esto en la misma o al menos hasta donde yo conozco,
porque ya te digo que yo no he hecho todas,
se lo he dicho algunas,
pero hasta donde conozco sí que hay cierta flexibilidad,
pero cuando son cercanas sino tendrían que tener dos equipos.
Cada centro, se especializa un poco en un tipo de imagen dependiendo
de el microscopio que tengan operábamos emplear varias técnicas
en un mismo centro entiendo que es muy difícil
porque los aparatos deben ser bastante caros,
es yo te diría exactamente eso que han aquí
en términos de ciencia en España sería bastante complicado tener más
de un microscopio.
Es verdad que cuando yo lo empleé estaba
en China y teníamos tres microscopios distintos,
pero a pesar de ello casi siempre se realizan las mismas técnicas
y en cualquier caso al final los resultados de estas técnicas
van a ser semejantes entre sí; es decir,
no vas a conseguir mucho más si haces este y luego haces
esto de la misma muestra o demuestras parecidas vas
a ver más o menos lo mismo.
Entonces a veces no tiene tampoco especial interés
en ir más de una, a lo mejor sí que te puede interesar.
En un microscopio, sufre resolución y uno electrónico, por ejemplo,
porque ahí sí que podría jugar un poco más con distintas cosas,
pero en el caso de las de súper resolución al final
vas a haber cosas muy parecidas.
Al final es la técnica que dominemos por los grupos que tengas
pero bueno son relativamente fáciles en realidad nada.
La de las técnicas que ha explicado, que ahora no es decir
cuáles eran las siglas pero era de transmisión
y obtenías al final una imagen tridimensional
y entonces decía es que se derrotaba la muestra para sí
recomponer la imagen tridimensional,
pero entiendo que la preparación de la muestra en ese caso
es diferente a las otras,
porque las otras tienes una lámina delgada,
y aun in situ, giras una lámina de llevada al final
vamos a lo que yo me estoy imaginando,
hay algo obtendría siempre la misma imagen,
con lo cual tendrá que ser una lámina delicada en las tres directivas,
en los tres ejes digamos,
no para que al rotar la puedan transmitirse los electrones,
o sea cómo es.
Esa preparación demuestra, pues la preparación realmente.
Si es una lámina delgada,
lo que pasa es que cuando la tiene es así; digamos,
pues haces una primera imagen en las de electrones,
perdón le da, sacaría una imagen, pues imagínate si fuera este,
pues damos por lo ves.
Primero así sí, pero al irlo madre me da hostilidad,
pero abrirlo rotando; vas a ir viendo primero este corte,
luego este corte, luego deporte,
y así girando entonces.
Al final,
como realmente no quiere ver todo el mando,
sino que quieren ver algo por una molécula que es muy pequeña
dentro vas a acabar viendo más o menos no toda,
porque es verdad que tiene un límite de de ángulo que suelen ser.
En el mejor de los casos, más menos -70.
Normalmente, más menos -60;
o sea que hay una parte ciega que no puedes ver,
porque es verdad que al irlo rotando también
aumentase el grosor de la muestra,
porque, claro, no veo que está,
es que cuando está allí y hay un límite
en el que ya no lo capturas, bien, entonces no lo siguen totalmente,
pero la idea es un poco esa.
Cómo hacer.
Tomo grafías todas las veces,
y luego hacen una recomposición tridimensional,
pero sí si lo hay tal cual lo has dicho luego bueno, simplemente,
que aparte de tú has hablado de la, del rango de la longitud visible
para los espectro,
perdón-para los microscopios ópticos.
Pero también pueden existir detectores infrarrojo, Rahman etc,
que amplían poco por lo menos a nivel de determinar la composición
no van a cambiar ampliar el tipo de estructuras
que ves, pero sí dar información sobre la composición, verdad?
No solamente la mystery sino definitivamente,
y es que ahí no me quería meter, he sido yo no me quería meter mucho
porque es verdad que ahí está lo eraman, que yo no lo he hecho nunca,
y es que es verdad que se utiliza muchísimo para conocer
la composición química y demás, cómo no, en ese campo
es verdad que yo no me siento muy, muy experta no quería introducirlo
porque tampoco era la parte de microscopía como tal,
pero sí totalmente cierto.
Puedes utilizar todo ese espectro lo único que claro en la microscopía
normalmente no o empleadas fotones o releer enviar ya electrones ya
como que el otro lo han dejado un poco para otras técnicas,
pero sí totalmente, o la cristal orografía de rayos equis total
como lo hemos mencionado así muy breve,
pero evidentemente sí sí por supuesto.
Bueno, algunas no somos tampoco muchas ahora mismo, muy bueno,
voy a mirar un momento el correo, porque como dejé el correo,
si alguien tenía culpa de mí un momentito
y creo que no, no me ha llamado nada.
Creo que no hay preguntas online.
Vale, pues no, muchas gracias y no teníais más preguntas.